astma oskrzelowa przyczyny objawy leczenie

Oddzielne eksperymenty oszacowały, że stosunek normalnych do pojedynczych zmutowanych transkryptów w naskórku tej heterozygoty wynosił około 30: 1. Aby określić, czy 4080inGG w rekonstancyjnych komórkach naskórka probanda dawało transkrypty, których poziomy przekraczały te uzyskane z allelu o samym 4003delTC, przeprowadzono szereg eksperymentów. Najpierw, rekonstytucyjne komórki naskórka w probandzie izolowano za pomocą LCM i poddano obróbce, aby uzyskać całkowity RNA. Ten RNA poddano odwrotnej transkrypcji, amplifikowano PCR przy użyciu starterów specyficznych dla sekwencji, które zawierały lub nie zawierały 4080inGG, i oznaczano ilościowo metodą densytometrii. Stosując to podejście, oddzielne eksperymenty wykazały, że podwójny mutant transkryptu był obecny na poziomie 2,5-krotności poziomu transkryptów zawierających sam 403delTC. W innych badaniach przeprowadzonych równolegle, RNA z komórek naskórka odwracających proband było odwrotnej transkrypcji i amplifikowano za pomocą PCR, aby uzyskać cDNA obejmujące egony 51-56. Te cDNA klonowano i analizowano w celu określenia częstotliwości podwójnie zmutowanych i pojedynczych mutantów w 25 losowo wybranych próbkach. W tych badaniach podwójnie zmutowany cDNA występował w 84% próbek (tj. W poziomach 5-krotnie wyższych od transkryptów pochodzących z samego 4003delTC). Podsumowując, oba te podejścia wskazywały, że 4080nsGG ustabilizowało transkrypty COL17A1 w rekonstancyjnych komórkach naskórka probandu i przeciwdziała zanikowi mRNA, w którym pośredniczy nonsens, który inaczej wpływa na transkrypty niosące 4003delTC. Aby ustalić, czy ta mutacja przywracająca ramiona spowodowała produkcję immunoreaktywnego białka, keratynocyty z 2 miejsc biopsji na probandie zostały rozwinięte w hodowli, biosyntetycznie znakowane radioaktywnie i badane przez immunoprecypitację z użyciem przeciwciała poliklonalnego skierowanego przeciwko kolagenowi typu XVII. Chociaż keratynocyty z lewego przedramienia nie wytwarzały kolagenu typu XVII, osoby z lewego ramienia syntetyzowały białko o masie 180 kDa, które wędrowało z kolagenem typu XVII wytwarzanym przez normalne keratynocyty (Figura 5). Zdolność do identyfikacji kolagenu immunoreaktywnego typu XVII w tym zestawie keratynocytów została uznana za przypadkową, biorąc pod uwagę niezdolność przewidywania, które miejsca skóry były. Dodatnie. Te wyniki immunoprecypitacji potwierdzają badania mikroskopowe IF wskazujące, że niektóre biopsje skóry tego pacjenta były całkowicie pozbawione kolagenu typu XVII, podczas gdy inne wykazywały niejednolitą ekspresję tego białka (9). Rycina 5 Badania immunoprecypitacji biosyntetycznie znakowanych radioaktywnie ekstraktów z keratynocytów wyhodowanych z probanda lub normalnej kontroli. (a) Przeciwciało królika do kodowanego bakulowirusem rekombinowanego kolagenu typu XVII wytrąciło białko o masie 180 kDa w normalnych keratynocytach, ale nie w keratynocytach pacjenta (ten ostatni pobrano z lewego przedramienia probanda). (b) Badania keratynocytów pochodzących z lewego ramienia probanda wykazały pasmo 180 kDa, które wędrowało z kolagenem typu XVII wytwarzanym przez normalne keratynocyty. Jako kontrolę pozytywną, przeciwciało królika przeciwko białku fuzyjnemu pemfigoidowego antygenu (BPAG1) wytrąciło białko 230 kDa we wszystkich próbkach. Żadne białka nie zostały wytrącone przez preimmunizowaną surowicę króliczą. Czas ekspozycji wynosił odpowiednio 6 i 10 dni dla aib. Czterotygodniowa ekspozycja nie wykryła kolagenu typu XVII w próbce od pacjenta. Dyskusja W niniejszym raporcie opisano rodzaj rewaskularyzacyjnego mozaikowania, którego wcześniej nie udokumentowano u ludzi, a mianowicie częściową korektę genu przez mutację przywracającą ramę. Jak pokazano w tym badaniu, ta mutacja korygująca przywróciła normalną ramkę odczytu tuż przed PTC, przeciwdziała zanikowi mRNA, w którym pośredniczy nonsens, i doprowadziła do wytworzenia białka o odpowiedniej immunoreaktywności i wielkości. Odkrycia kliniczne i genetyczne u naszych pacjentów kontrastują z wynikami innego, niedawno opisanego pacjenta z GABEB z rewizyjnym mozaikowością (4)
[podobne: eskulap pabianice, ból kolana po bieganiu, guz neuroendokrynny ]