chirurgia szczękowa siedlce

W celu określenia, czy ekspresja ektopowa HBSP indukuje śmierć komórki, komórkowa zawartość DNA w komórkach CCL13 wyrażających GFP-HBSP lub GFP została określona przez FACS. analiza. Trzydzieści sześć godzin po transfekcji 30% komórek wykazujących ekspresję HBSP (Figura 4b, panel 2) wykazało szczytową charakterystykę sub-G1 hipoploidycznych komórek apoptotycznych, w porównaniu z 7% nietransfekowanych komórek (Figura 4b, panel 1). Nieapoptotyczne komórki eksprymujące HBSP wykazywały prawidłowy rozkład w cyklu komórkowym (Figura 4b, panele 3 i 4). Sześćdziesiąt siedem godzin po transfekcji 68% komórek wykazujących ekspresję HBSP było apoptotycznych (Figura 4b, panel 6), podczas gdy apoptozę wykryto tylko w 13% kontrolnych komórek transfekowanych GFP (Figura 4b, panel 5). Mikroskopia konfokalna komórek transfekowanych GFP-HBSPa ujawniła kondensację chromatyny i fragmentację jądrową (Figura 4c). Efekt apoptotyczny HBSP był również testowany na przejściowo transfekowanych komórkach HuH7, w których zawartość DNA w całkowitej populacji komórek określano przy użyciu FACS .. analiza. Osiemnaście procent komórek okazało się apoptotyczne po transfekcji wektorem specyficznym dla HBSP, w porównaniu z 7% i 23% po transfekcji DNA plemników łososia lub p53 (działając jako kontrola pozytywna), odpowiednio (dane nie przedstawione). Apoptoza indukowana przez HBSP w komórkach HuH7 została zweryfikowana przez fragmentację jądrową w komórkach transfekowanych pozytywnie pod wpływem (3-galaktozydazy (Figura 4d). Ogólnie, nasze dane pokazują, że ektopowa ekspresja natywnej i sprzężonej z GFP HBSP indukowała apoptozę bez bloku cyklu komórkowego. Figura 4 Wpływ ekspresji HBSP na żywotność. (a) Komórki CCL13 eksprymujące GFP (panele i 3) lub GFP-HBSP (panele 2 i 4). W tym samym naczyniu transfekowane komórki oglądano stosując 36 godzin GFP (panele i 2) i 96 godzin (panele 3 i 4) po transfekcji. (b) zawartość DNA komórek transfekowanych GFP-HBSP lub GFP CCL13a (FACS .). Sortowane komórki eksprymujące GFP-HBSPa (panel 2) lub nietransfekowane komórki (panel 1) analizowano 36 godzin po transfekcji. Panele 3 i 4: Analiza cyklu komórkowego na tych samych populacjach komórek. Panele 5 i 6: Posortowane komórki transfekowane GFP-HBSPa (panel 6) lub komórki transfekowane GFP (panel 5) analizowano 67 godzin po transfekcji. (c) Skondensowana DNA HBSP. Mikrofotografia konfokalna komórek CCL13 (zielona) 40 godzin po transfekcji GFP-HBSP. Jądra barwiono 7-AAD (czerwony). Zastosowano filtry o różnych kolorach: czerwony (u góry), zielony (u dołu) lub oba fluorescencje w tym samym polu (w środku). (d) indukowana przez HBSP apoptoza w komórkach HuH7. Komórki HuH7 kotransfekowano pCH110 (3-galaktozydazą i pHBSP (panele 2 i 4) lub DNA plemników łososia (panele i 3). Transfekowane komórki ujawniono przy użyciu testu (3-galaktozydazy (niebieskiego) (panele i 2) i fragmentacji jądrowej po zabarwieniu 7-AAD (czerwone, panele 3 i 4). Dyskusja Ogólnie przyjmuje się, że zdolność kodowania genomu wirusa HBV została w pełni udokumentowana (16). W rzeczywistości nasze dane pokazują, że in vivo, RNA splicingowe koduje nowe białko HBV, które jest celem dla odpowiedzi immunologicznej. Nie stwierdzono korelacji między częstością występowania przeciwciał anty-HBSP a wiremią HBV w surowicy pacjentów z przewlekłym zakażeniem HBV. Podobnie nie wykazano korelacji między poziomem ekspresji HBSP a ekspresją kapsydu i białka otoczkowego w wątrobach zakażonych HBV. Sugeruje to mechanizm regulacyjny syntezy pojedynczego splicingu RNA, niezależny od poziomu pregenomicznej ekspresji RNA. In vitro ektopowa ekspresja HBSP wykazała brak wpływu na replikację i transkrypcję DNA HBV. Oczywiście, na podstawie danych z tego badania nie można wykluczyć możliwości wpływu HBSP na inne etapy dojrzewania i wydzielania cząstek wirusa. Jednak nasze wyniki wskazują na potencjalnie interesujące działanie HBSP na żywotność komórek
[przypisy: wkładka wewnątrzmaciczna cena, zdrovita nowy tomysl, gumtree inowrocław ]