dentysta 24h olsztyn

Wyznakowane apoptotyczne tymocyty inkubowano z komórkami KIM1-PK1, które uprzednio traktowano cytochalasiną D (30 .M), nocodazolem (30 .M) lub podłożem. Tymocyty całkowite (związane plus fagocytowane) były równoważne w każdej grupie; jednak fagocytoza była hamowana przez cytochalasynę D i nocodazol. (C) Obrazy fluorescencji komórek KIM1-PK1 po koinkubacji z cząstkami zymosanu znakowanymi fluorescencją (lewy, 0,5 mg / ml), kulkami lateksu (środek, fluorosfera, rozcieńczenie 1: 800) lub heparyną (prawy, 25 ug / ml ) przez godzinę w 37 ° C. Nie zauważaj poboru żadnej z tych cząsteczek. (D) Preinkubacja komórek KIM1-PK1 z przeciwciałami anty-Kim-1 (AWE2), ale nie IgG, obniżonym wskaźnikiem fagocytarnym (liczba apoptotycznych komórek LLC-PK1 / fagocyt KIM1-PK1), co oceniono za pomocą cytometrii przepływowej (50 .g; / ml, lewy panel). Prawe panele pokazują fotomikrografie komórek KIM1-PK1 po internalizacji i wiązaniu komórek apoptotycznych LLC-PK1 znakowanych CMFDA, które wstępnie traktowano (1 godzinę) rozpuszczalnym mKIM1-Fc (prawy dolny panel, 0,8 ug / ml) lub traktowano IgG (prawy górny panel). Wstępne traktowanie mKIM1-Fc hamowało fagocytozę. Oryginalne powiększenie, × 40 (C); × 10 (D). Komórki KIM1-PK1 nie wiązały ani nie internalizowały znakowanego fluorescencyjnie zymosanu: Texas Red (0,5 mg / ml), kulki lateksowe. FITC (rozcieńczenie 1: 800) lub heparyna-FITC (25 ug / ml) w porównaniu do pcDNA-PK1 komórki (Figura 5C). To prawdopodobnie odzwierciedla brak ekspresji receptorów, takich jak receptor A zmiatający (SRA), jak również inne składniki mieloidalnych maszyn fagocytujących przez komórkę nabłonkową. W celu określenia, czy ekspresja KIM-1 nadaje również zwiększoną zdolność do przyjmowania nekrotycznych resztek komórkowych, przygotowaliśmy nekrotyczne, znakowane fluorescencyjnie komórki LLC-PK1 przez sonikację. Piętnaście razy więcej komórek KIM1-PK1 przyjmowało resztki komórek martwiczych (32,9%. 8,4%) w porównaniu z kontrolnymi komórkami nabłonkowymi pcDNA-PK1 (1,9%. 1,0%), co oceniono za pomocą cytometrii przepływowej i potwierdzono za pomocą mikroskopu (Figura 3C i Figura 4C) . Zatem komórki KIM1-PK1 internalizują komórki apoptotyczne i nekrotyczne. Wiadomo, że proteoglikany osnowy, takie jak siarczan heparanu, działają jako opsyny do usuwania komórek apoptotycznych i martwicowych szczątków (18), ale w tych badaniach heparyna, siarczan heparanu, nie wiązała się z komórkami KIM1-PK1. Aby określić rolę innych opsonin, takich jak białka dopełniacza i trombospondynę, przygotowaliśmy komórki apoptotyczne w pożywce bez surowicy i przeprowadziliśmy testy fagocytozy przy braku surowicy. Nie było różnicy w fagocytozie tymocytów apoptotycznych przez komórki KIM1-PK1 w obecności (20,9%. 1,6% komórek KIM1-PK1 fagocytowanych komórek apoptotycznych) lub nieobecności (28,6%. 5,2%) surowicy, co sugeruje, że opsoniny pochodzące z surowicy odgrywają brak roli w fagocytozie za pośrednictwem KIM-1. Aby pokazać dalszą swoistość KIM-1 w fagocytozie, wyrażaliśmy archetypowy receptor SRA w komórkach LLC-PK1. Chociaż SRA promował silne wiązanie apoptotycznych tymocytów, to tylko niewielki wzrost fagocytozy, 5.1. 0,3% w stosunku do 4,2. 0,3% (kontrola), potwierdzając wyjątkowość KIM-1 jako receptora fagocytarnego. Nasze badania pierwotnych komórek nabłonkowych szczura wykazały, że szczurzy Kim-1 funkcjonował bezpośrednio jako receptor fagocytujący (Figura 2). Następnie ocenialiśmy, czy wzmocniona fagocytoza nadawana przez ludzką ekspresję KIM-1 w komórkach KIM1-PK1 była bezpośrednio spowodowana działaniem KIM-1 jako receptorem apoptotycznym lub pośrednio z powodu zwiększonej regulacji wewnętrznej maszyny fagocytującej. Wstępne traktowanie komórek apoptotycznych rozpuszczalnym białkiem fuzyjnym ektodomeną KIM-1 (KIM1-Fc) (0,8 .g / ml) hamowało wychwyt do komórek KIM1-PK1 (Figura 5D). Podobnie, wstępne traktowanie komórek KIM1-PK1 przeciwciałem anty-Kim-1, które wiąże się z domeną Ig (AWE2) również hamowało fagocytozę komórek apoptotycznych (Figura 5D), które razem z pierwotnymi badaniami szczurzymi wskazują wiązania KIM-1 z apoptotycznym komórki poprzez domenę Ig
[patrz też: przychodnia ogrody bydgoszcz, tormentiol trądzik, olx pińczów ]