kamień nazębny pod dziąsłami

W teście wiązania bez komórek testowaliśmy, czy KIM-1 rozpoznaje PS, PE, fosfatydylocholinę (PC) lub anionowy kwas fosfatydowy (PA) przylegający do plastikowych studzienek. Ektodomena KIM-1 wiąże się swoiście z PS iw mniejszym stopniu z PE, ale nie z innymi fosfolipidami błony, PC lub PA (Figura 6E). Kd dla wiązania KIM1-Fc8 do PS obliczono z krzywej wiązania na 6,3 nM. W celu walidacji tego testu i tych obserwacji, potwierdziliśmy, że PS, PE i PC są związane równo z płytkami z tworzywa sztucznego przez wymywanie zaadsorbowanych lipidów w etanolu i analiza eluatów za pomocą TLC (dane nie przedstawione). Te badania sugerują, że KIM-1 jest receptorem PS, ale może także być receptorem dla PE, chociaż z niższym powinowactwem. Aby potwierdzić te właściwości w komórkach, wykorzystaliśmy liposomy zawierające PS do kompetycyjnego blokowania wychwytu komórek apoptotycznych przez komórki KIM1-PK1 (15). Wstępne traktowanie komórek KIM1-PK1 liposomami PS (0,2 mM) prawie całkowicie zniosło fagocytozę zależną od KIM-1, podczas gdy liposomy PC (0,2 mM) nie miały żadnego działania (Figura 6D). Dlatego uważamy, że KIM-1 jest nowym receptorem PS. W nerkach nie zidentyfikowano żadnych komórek śródmiąższowych, które wyrażały Kim-1 (ryc. 1). W szczególności nieobecne, zapalne makrofagi, ani neutrofile nie eksprymowały Kim-1. Hodowane makrofagi szpiku kostnego również nie eksprymowały Kim-1 przez ocenę transkryptu lub białka. Ponadto aktywacja za pomocą LPS lub deksametazonu nie indukowała ekspresji Kim-1 w makrofagach eksprymujących Emr-1 (antygen F4 / 80) (Figura 7). Dlatego wydaje się, że KIM-1 nie jest podobny do innych receptorów nabłonkowych komórek apoptotycznych, które są podobne lub identyczne z tymi stosowanymi przez makrofagi (4). Figura 7Makrofagi nie wyrażają Kim-1 / Tim-1. RT-PCR (lewy panel) dla mRNA Kiml z 7 makrofagów szpiku kostnego myszy hodowanych z LPS lub deksametazonem. Emr1 (antygen F4 / 80) i Gapdh zastosowano jako kontrole, a cDNA nerki myszy 48 godzin po niedokrwieniu zastosowano jako kontrolę pozytywną. Immunoblot (prawy panel) dla Kim-1 w lizatach białkowych z hodowanych makrofagów i niedokrwiennej nerki myszy. Należy zauważyć, że makrofagi pochodzące od szpiku kostnego myszy nie wytwarzają transkryptu Kim1 ani białka Kim-1, w stanie spoczynku lub aktywacji. BMMf, makrofagi pochodzące ze szpiku kostnego. Ekspresyjne komórki nabłonkowe KIM-1. Wiążą i internalizują utleniony LDL poprzez specyficzne interakcje z ektodomeną KIM-1. Receptory szczątków, pierwotnie nazwane przez Browna i Goldsteina ze względu na ich zdolność do wiązania utlenionych lipidów i odgrywania roli w tworzeniu komórek piankowatych (21), uczestniczą jako cząsteczki rozpoznające wzór w obronie gospodarza i wrodzonej odporności. Są również zaangażowani w uwięzienie i internalizację komórek apoptotycznych i nekrotycznych (20, 22-26). Błona komórkowa zdrowych komórek jest nieustannie utleniana, ale utlenione lipidy są aktywnie transportowane do wewnętrznej listki membrany (27). Jedynie w umierających lub nekrotycznych komórkach zewnętrzna błona komórkowa w liściach zachowuje utlenione fosfolipidy (28). Znakowane fluorescencyjnie (DiI) utlenione LDL (ox-LDL) związane z komórkami wyrażającymi ekspresję KIM-1. I internalizowane w 37 ° C (Figura 8, A i B). Zarówno wiązanie, jak i internalizacja znakowanego DII ox-LDL przez komórki KIM1-PK1 całkowicie zapobiegano przez koinkubację z 40-krotnym nadmiarem nieznakowanego ox-LDL (Figura 8C). Komórki KIM1-PK1 również wiązały się i internalizowały natywny LDL, podczas gdy kontrolne komórki pcDNA-PK1 nie (Fig. 8A). Zinternalizowany ox-LDL i natywny LDL były zlokalizowane głównie w wewnątrzkomórkowych pęcherzykach (Figura 8B). Stosując warunkowy układ ekspresyjny KIM-1 (Fig. 8D), potwierdzono, że wiązanie i internalizacja ox-LDL zależały od ekspresji KIM-1 (Figura 8D). Warto zauważyć, że podczas gdy receptory zmiatające klasy A, C i D nie wiążą natywnego LDL, doniesiono, że receptory zmiatające B klasy wiążą natywny LDL, jak również PS skutecznie
[przypisy: olx wieruszów, wakacje mikołajka chomikuj, wkładka wewnątrzmaciczna cena ]