lux med praca wrocław

Tak więc KIM-1 ma pewne podobieństwo funkcjonalne z tą ostatnią klasą receptorów (20, 29. 32). Figura 8 Komórki nabłonka ekspresjonujące KIM-1 (3 wiążą i internalizują ox-LDL, a ektodomena KIM-1 wiąże się specyficznie z ox-LDL. (A) Wykres pokazujący internalizację wyznakowanego DII ox-LDL lub natywnego LDL przez komórki KIM1-PK1 lub komórki pcDNA-PK1 w ciągu godziny w 37 ° C, jak określono ilościowo za pomocą spektrofluorymetrii zlizowanych komórek. (B) Fotomikrografie komórek KIM1-PK1 i komórek pcDNA-PK1 wykazujących zinternalizowany ox-LDL lub natywny LDL w pęcherzykach wewnątrzkomórkowych. Oryginalne powiększenie, × 40. (C) Wykres pokazujący wpływ 40-krotnego nadmiaru nieznakowanego oks-LDL na internalizację wyznakowanego DII oks-LDL przez komórki KIM1-PK1 lub komórki pcDNA-PK1 inkubowane w 37 ° C przez godzinę. Pobranie fluorescencyjnej lipoproteiny oznaczono ilościowo za pomocą spektrofluorymetrii zlizowanych komórek. (D) Wykres pokazujący wpływ doksycykliny na komórki MDCK z KIM1. Tet-off. zdolność do internalizacji znakowanego DII ox-LDL i natywnego LDL znakowanego przez DiI. W obecności doksycykliny (DOX +) ekspresja KIM-1 jest tłumiona. W tych warunkach po godzinie nie ma znaczącej ilości znakowanej lipoproteiny. W nieobecności doksycykliny (DOX-) ekspresja KIM-1 nie jest tłumiona i istnieje wyraźny wychwyt obu lipoprotein. (E) Krzywe wiązania in vitro oczyszczonych białek KIM1-Fc, ludzkich IgG1 lub c-Ret-Fc z płytkami ELISA powleczonymi oxL-LDL. Wiązanie KIM1-Fc wykryto anty-ludzką IgG. Koniugowane HRP przeciwciało, a następnie test kolorymetryczny. Uwaga: KIM1-Fc silnie wiąże się z ox-LDL, ale nie z niepowlekanym tworzywem sztucznym, podczas gdy białka kontrolne ludzkie IgG i c-Ret. Fc nie wiążą ox-LDL ani plastiku. (F) Wykres pokazujący wpływ wstępnej obróbki komórek KIM1-PK1 albo 40 albo 50 .g / ml ox-LDL na fagocytozę znakowanych fluorescencyjnie apoptotycznych komórek LLC-PK1, jak oceniono za pomocą cytometrii przepływowej. (* P = 0,0009 [40 .g / ml ox-LDL]; ** P = 0,0003 [50 .g / ml ox-LDL] w porównaniu z brakiem wstępnej obróbki ox-LDL, słupki błędu wskazują SD). Aby zademonstrować, że internalizacja ox-LDL była pośredniczona przez bezpośrednią interakcję z ektodomeną KIM-1, studzienki z tworzywa sztucznego, powlekane ox-LDL lub pozostawione niepowlekane, inkubowano z oczyszczonym białkiem fuzyjnym KIM1-Fc lub kontrolnymi białkami Fc (ludzkie IgG, c -Ret. Fc). Po przemyciu niezwiązanych białek Fc, specyficzne wiązanie KIM1-Fc zidentyfikowano za pomocą testu kolorymetrycznego z użyciem wtórnych przeciwciał skoniugowanych z peroksydazą chrzanową przeciwko ludzkiemu Fc (IgG) (Figura 8E). KIM1-Fc, ale nie kontrolne białka c-Retc Fc lub ludzkie IgG, związane z ox-LDL z Kd 9,4 nM. Uważamy, że zdolność do swoistego wiązania się z ox-LDL oprócz PS potwierdza, że KIM-1 jest nowym receptorem wymiatacza. Ponieważ KIM-1 jest nie tylko receptorem PS i PE, ale także receptorem zmiatającym, oceniano, czy zapobiegano wchłanianiu komórek apoptotycznych przez wstępne traktowanie komórek KIM1-PK1 za pomocą ox-LDL (Figura 8F). Fagocytoza została zmniejszona o 76,4% (12,3%. 1,7% w porównaniu z 2,9%. 1,4% z 40. G / ml ox-LDL). Niektóre receptory zmiatające wiążą epitopy powierzchni komórek drobnoustrojów. Chociaż komórki KIM1-PK1 nie wiązały ściany komórkowej drożdży, zymosanu (Figura 5C), komórki KIM1-PK1 wiązały i internalizowały bakterie Gram-ujemne (E. coli) i pozytywne (S. aureus) (Figura 9). Figura 9 Komórki KIM1-PK1, ale nie komórki pcDNA-PK1 wiążą i internalizują bakterie Gram-ujemne (E. coli) i Gram-dodatnie (S. aureus). KIM-1 zwiększa zdolność komórek nabłonka do fagocytozy bakterii E. coli i S. aureus. % Fagocytozy, procent komórek z internalizowanymi bakteriami. Paski błędów wskazują SD. Dyskusja Dotychczas receptory zmiatające były związane z komórkami linii mieloidowej, w tym makrofagami, komórkami dendrytycznymi i, w mniejszym stopniu, neutrofilami. Jest to pierwsza demonstracja naszej wiedzy na temat receptora zmiatającego komórki nabłonka biorącego udział w fagocytozie, który nie jest wyrażany przez komórki linii mieloidalnej
[więcej w: ból kolana po bieganiu, wakacje mikołajka chomikuj, olx wieruszów ]