mri elbląg

Poprzednie badania pokazały, że emerin jest zwykle umieszczony na obręczy nuklearnej w Zmpste24. /. komórki (13). Rycina 4 Lokalizacja erezyn jest normalna w pierwotnych fibrylastach embrionalnych Lmna +/-. Lokalizację Lamin A i C (czerwony) i emerin (zielony) w dzikiego typu, Lmna A / a i Lmna + / + fibroblastów określono za pomocą konfokalnej mikroskopii fluorescencyjnej. DAPI zastosowano do wizualizacji DNA. Aby uzyskać porównanie side-by-side z Lmna. /. komórki, typu dzikiego i Lmna + / + fibroblasty zmieszano razem z Lmna A /. komórki w równych proporcjach i umieszcza na tym samym szkiełku nakrywkowym. (A. C) Komórki typu dzikiego plus Lmna. /. komórki. Komórki zabarwiono przeciwciałem przeciwciało przeciw A / C, a komórki typu dzikiego (strzałki) zidentyfikowano za pomocą czerwonej fluorescencji. Zgodnie z oczekiwaniami opartymi na badaniach Sullivana i współpracowników (11), emerin zazwyczaj znajdował się w jądrach komórek typu dzikiego, ale został błędnie zinterpretowany do ER w Lmna A /. komórki. (D. F) Lmna + / + komórki plus Lmna. /. komórki. Komórki platerowano i barwiono jak opisano dla komórek typu dzikiego. Komórki Lmna + / + (strzałki) identyfikowano za pomocą czerwonej fluorescencji. Emerynę umiejscowiono w jądrze komórek Lmna + / + w sposób nieodróżnialny od komórek typu dzikiego. Figura 5Laminę C zwykle kieruje się do otoczki jądrowej w pierwotnych fibrylowych zarodkach Lmna +/-. Komórki dzikiego typu i Lmna + / + inkubowano z przeciwciałami przeciwko laminatowi A / C (czerwony) i LAP2 (zielony) lub DAPI w celu wizualizacji DNA (niebieski), a komórki badano za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej. Czerwona fluorescencja w komórkach typu dzikiego identyfikuje zarówno laminat A, jak i lamin C, podczas gdy czerwona fluorescencja w komórkach Lmna + / + reprezentuje tylko zabarwienie laminowane C. Zarówno lamin C, jak i LAP2 w komórkach Lmna + / + znajdowały się w jądrze i obręczy jądrowej, a ich rozkład był nie do odróżnienia od komórek typu dzikiego. Duża część Lmna. /. komórki zawierają zniekształcone jądra (11). Aby ustalić, czy brak laminatu A spowodował podobne nieprawidłowości, zbadaliśmy odsetek zniekształconych jąder w LmnaLCO / +, Lmna + / +, pierwotne fibroblasty zarodkowe LmnaLCO / +, Lmna P / a, i Lmna + / +. W 3 niezależnych eksperymentach, z których każdy obejmował kilka niezależnych linii komórkowych i oceniano przez 2 obserwowanych przez genotyp obserwatorów, odsetek zniekształconych jąder w komórkach LmnaLCO / + i Lmna + / + był tylko nieznacznie większy niż w komórkach typu dzikiego (P = 0,007,. 2 test, Figura 6). Nie zaobserwowano jednak wzrostu częstości zniekształconych jąder w komórkach LmnaLCO / + (Figura 6). Figura 6 Analiza kształtu jądra w Lmna A / L, LmnaLCO / y, LmnaLCO / + i Lmna + / + fibroblasty. Osłonę jądrową komórek wizualizowano za pomocą przeciwciał przeciwko Laminacji B lub LAP2, a liczbę komórek z zniekształconymi jądrami ocenił 2 przeszkolonych obserwatorów niewidomych na genotyp. Słupki pokazują średnią częstotliwość zniekształconych jąder; liczba zniekształconych jąder i całkowita liczba zbadanych jąder są pokazane w każdym takcie. Wykres podsumowuje dane dla 3 niezależnych eksperymentów (wypełnione kółka). Zarówno komórki LmnaLCO / +, jak i Lmna + / + miały nieznaczny, lecz statystycznie istotny wzrost liczby zniekształconych jąder w porównaniu z komórkami typu dzikiego (P <0,007, test 2). Aby dalej badać możliwość, że blaszka jądrowa w komórkach Lmna + / + może być nienormalna, zbadaliśmy zakres deformacji jądrowej w odpowiedzi na zastosowanie dwuosiowego odkształcenia do komórek. Jednorodny dwuosiowy szczep naniesiono na komórki dzikiego typu i Lmna + / + hodowane na membranach silikonowych pokrytych fibronektyną, a stopień deformacji jądrowej zmierzono i wyrażono jako stosunek szczepu jądrowego do szczepu błonowego. Pomiary znormalizowanego szczepu jądrowego zachodziły zasadniczo w komórkach Lmna + / + i typu dzikiego; gdy uwzględniono wszystkie pomiary, zauważyliśmy niewielki, ale znaczący wzrost znormalizowanego szczepu jądrowego w komórkach Lmna + / + w porównaniu z komórkami typu dzikiego (typ dziki, 0,091 . 0,016, n = 72, w porównaniu z Lmna + / +, 0,250. 0,022, n = 103; P <0,0001; Figura 7) [hasła pokrewne: climea test, olx wieruszów, zdrovita nowy tomysl ]