neurolog kalisz medix

Zwróć uwagę na wyraźne wzmocnienie fagosomów Kim-1 i Kim-1 w fagocytarnym kubku związanych komórek apoptotycznych. (B) Obraz pierwotnych wyhodowanych komórek nabłonka szczura, wszystkie wyrażające cytokeratynę (zielony), ale wykazujące heterogenną ekspresję Kim-1 (czerwony). Skalowane pręty: 10 .m. (C) Liczba komórek apoptotycznych związanych lub fagocytowanych na 100 komórek nabłonkowych 100 Kim-1 (3 lub 100 Kim-1 ujemnych po hodowli z wyznakowanymi komórkami apoptotycznymi i przemywanie w celu usunięcia związanych komórek. Uwaga Komórki Kim-1 (3-pozytywne wykazują zapaloną fagocytozę. ** P <0,001. (D) Indeks fagocytarny (liczba komórek apoptotycznych / 100 fagocytów) hodowli komórek nabłonka pierwotnego Kim-1 (dodatniego traktowanych uprzednio monoklonalnymi przeciwciałami anty-szczurzej oczyszczonymi z Kim-1 (15 .g / ml), a następnie kokultury ze znakowanymi komórkami apoptotycznymi. Komórki nabłonkowe pobrano z płytek i pojedynczych komórek nabłonka w zawiesinie oznaczono dla wskaźnika fagocytarnego. Należy zauważyć, że przeciwciała anty-Kim-1 skierowane na zewnątrzkomórkową domenę blokują fagocytozę w porównaniu z komórkami preinkubowanymi z izotypowymi przeciwciałami kontrolnymi. * P <0,01. Figura 3 Linie komórek nabłonka nerki KIM-1 (3 chciwie wiążą się i fagocytują materiał apoptotyczny i nekrotyczny. (A) KIM-1 (czerwony) w komórce KIM1-PK1 (lewy panel) ulega ekspresji na wysokich poziomach (strzałki) w miejscu wiązania wielu apoptotycznych tymocytów (zielony i niebieski) i jest częścią początkowego kubka fagocytarnego ( grot). Pasek skali: 5 m. W późniejszych punktach czasowych (prawy panel) KIM-1 pozostaje związany ze zinternalizowaną komórką apoptotyczną, co powoduje wzmocnienie pierścienia (strzałka) ciała apoptotycznego. Granica komórki jest zaznaczona przerywanymi liniami. Pasek skali: 10 .m. (B) Wiele apoptotycznych tymocytów wyznakowanych CMFDA (zielone) było umiejscowionych wewnątrzkomórkowo w komórkach wyrażających KIM-1 (3 po współhodowli. Wewnętrzne apoptotyczne tymocyty wizualizuje się w konfokalnej płaszczyźnie filamentów korowej aktyny (czerwonej) w tym konfokalnym obrazie potwierdzającym internalizację. Jądra komórek (N) są podświetlone. Pasek skali: 10 .m. (C) DIC z fluorescencyjnymi (zielonymi) obrazami mikroskopowymi komórek KIM1-PK1 potwierdzają spożycie znakowanych CMFDA (zielone) apoptotycznych komórek LLC-PK1 (lewy panel) lub sonikowanych szczątków komórek LLC-PK1 (środkowy panel). Komórki pCDNA-PK1 w tym samym eksperymencie nie wykazujące fagocytozy komórek apoptotycznych (prawy panel). Te badania mikroskopowe potwierdzają internalizację fluorescencyjnych apoptotycznych lub nekrotycznych szczątków komórek (grotów strzałek). Oryginalne powiększenie, × 60. Aby oznaczyć fagocytozę za pomocą automatycznego systemu, komórki KIM1-PK1 eksprymujące KIM-1 (3 hodowano przez godzinę w 37 ° C z fluorescencyjnie znakowanymi apoptotycznymi komórkami LLC-PK1 lub apoptotycznymi tymocytami, po czym nieestetyczne komórki apoptotyczne wypłukano i żywe komórki były podniesiony do zawiesiny pojedynczych komórek za pomocą EDTA i trypsyny. Związane, niezainternalizowane komórki apoptotyczne są usuwane za pomocą tej procedury. W porównaniu z komórkami LLC-PK1 stabilnie transfekowanymi pustym wektorem (pcDNA-PK1), komórki KIM1-PK1 bardziej gwałtownie internalizowały komórki apoptotyczne (Figura 3). Gdy ilościowo ocenia się za pomocą cytometrii przepływowej, która mierzy zwiększoną fluorescencję komórek nabłonka w zawiesinie po spożyciu fluorescencyjnie znakowanych komórek apoptotycznych, komórki KIM1-PK1 wykazują około 10-krotnie większą fagocytozę apoptotycznych komórek LLC-PK1 (14,8%. 4,2% było dodatnich dla komórek apoptotycznych vs. 1,5%. 0,4% w komórkach kontrolnych) i 2-krotnie większa fagocytoza apoptotycznych tymocytów (24,2%. 1,2% komórek KIM1-PK1 vs. 12,0%. 0,7% komórek pcDNA-PK1) (Figura 4B) ( 13, 14). Bezpośrednia mikroskopia fluorescencyjna koinkubacji, które zostały zanalizowane za pomocą cytometrii przepływowej, potwierdziła znaczny wzrost zinternalizowanych komórek apoptotycznych; po ocenie przez ślepe mikroskopowe zliczanie losowych pól (15, 16), 21,5%. 2,8% komórek KIM1-PK1 internalizuje apoptyczne tymocyty w porównaniu z 4,6%. 1,4% w komórkach pcDNA-PK1 [więcej w: tomasz pągowski wikipedia, duofilm cena, gumtree inowrocław ]