operacja przegrody nosa warszawa

Cytometria przepływowa została przeprowadzona przy użyciu Becton Dickinson FACScan (San Jose, Kalifornia, USA). Nierozdzielone heparynizowane PB rozprowadzono w probówkach do barwienia (Falcon 2054) przy 100 .l / probówkę i przemyto dwukrotnie przy użyciu 2 ml buforu do cytometrii przepływowej (HBSS zawierający Ca2 + i Mg2 + / 0,1% BSA / 0,1% NaN3). Komórki barwiono optymalnymi stężeniami pierwotnego mysiego mAb przeciw świni (niezwiązanego lub sprzężonego FITC) przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Do barwienia pośredniego dodano kozie anty-mysie IgG (specyficzne dla łańcucha ciężkiego i lekkiego) FITC (GAMF, Sigma Immunochemicals, St. Louis, Missouri, USA) przez dodatkowe 30 minut w temperaturze pokojowej. W celu wykrycia komórek pokrytych immunotoksyną dodano sam drugi odczynnik. Aby określić procent komórek dawcy wśród populacji komórek PB, PB inkubowano ze specyficznym dla FITC sprzężonym ze świń monocytem / granulocytem sprzężonym z FITC mAb 74-22-15 (BALB / c, IgG1K) (22) razem z biotyną swoistą dla dawcy -koniugowane mAb 1038H-10-9 (B10.PD1, IgMK) specyficzne dla PAA ze świńskiej grypy (antygen alleliczny trzody chlewnej) (23), a następnie fikoerytryna streptawidyny (PESA, PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA). RBC poddano lizie i komórki utrwalono za pomocą roztworu do lizy FACS (Becton Dickinson) przed przejęciem. Dane analizowano za pomocą oprogramowania do analizy list listy Winlist (Verity Software House, Topsham, Maine, USA). Przygotowanie zawiesin komórek limfoidalnych do cytometrii przepływowej. Próbki biopsji krezkowego węzła chłonnego i grasicy umieszczono w szalkach Petriego zawierających bufor cytometrii przepływowej (HBSS zawierający 0,1% BSA i 0,1% NaN3). Zawiesiny komórkowe przygotowano przez zmielenie tkanki pomiędzy zmrożonymi końcami 2 szkiełek, aż pozostała tylko włóknista tkanka. Następnie komórki przepuszczono przez sito FACS przed zliczaniem komórek i barwieniem dla cytometrii przepływowej. W celu barwienia metodą cytometrii przepływowej komórki rozdzielono na probówki w liczbie 106 komórek / probówkę. Barwienie było jak opisano powyżej, z tym wyjątkiem, że nie dodano roztworu do lizy FACS. Jodek propidyny dodano bezpośrednio przed pozyskaniem w celu wykluczenia martwych komórek. Przeszczepy skóry. Przeszczepy skóry wykonano za pomocą wcześniej opublikowanych technik (24). W skrócie, skórkę o podzielonej grubości zebrano od dawcy i umieszczono na głębokim łóżku o podzielonej grubości na klatce piersiowej biorcy. Przeszczepy badano codziennie aż do momentu odrzucenia. Odrzucenie określono makroskopowo i zdefiniowano jako rozlaną sinicę i stwardnienie przeszczepu. Wyniki Optymalizowanie dawkowania i czasu podawania pCD3-CRM9 w celu umożliwienia stabilnego wszczepienia komórek krwiotwórczych u miniaturowej świni. Tabela podsumowuje wszystkie zwierzęta leczone tym niemamulozowym protokołem. Dawkowanie i czas podawania pCD3-CRM9 zoptymalizowano, aby umożliwić wszczepienie tych zwierząt przy minimalnej toksyczności. Początkowy schemat dawkowania (podawany zwierzęciu 12534) wybrano w oparciu o wcześniejsze doświadczenia z zastosowaniem tej immunotoksyny w celu zmniejszenia komórek T świń in vivo bez jakiegokolwiek innego warunkowania. Maksymalne zubożenie wystąpiło 2 dni po drugiej dawce, gdy podawano pCD3-CRM9 w 2 podzielonych dawkach 0,1 mg / kg, co 2 dni (16). Tabela Podsumowanie miniaturowej świni leczonej preparatem niemieloablacyjnym Chociaż zubożenie limfocytów T było najlepsze w tej dawce i czasie, ryzyko powikłań z powodu obwodowej polineuropatii powodowanej przez składnik toksyczny immunotoksyny było zwiększone, gdy dawki 0,1 mg / kg lub większe zostały użyte. Zwierzę 12534 podawano 2 dawki 0,05 mg / kg pCD3-CRM9 w dniach 0 i 2, dla całkowitej dawki 0,1 mg / kg. Zwierzę to rozwinęło powikłania oddechowe z powodu polineuropatii indukowanej immunotoksyną i zostało uśmiercone w dniu 33. Dawkę pCD3-CRM9 zmniejszono zatem do 0,05 mg / kg w dawce, aby uniknąć neurotoksyczności u miniaturowej świni.
[patrz też: medix wieruszów, neorutin c, gumtree inowrocław ]