powiększone ślinianki objawy

Różnice statystyczne obliczono w teście P2. Antysensowne oligonukleotydy Prelamin A. W celu zidentyfikowania aktywnego antysensownego oligonukleotydu RNAz dla prelaminy A, szereg 78 chimerycznych antysensownych oligonukleotydów 2 (3-OME (3) oceniano w komórkach śródbłonka mysiego mózgu (bEND) pod kątem zdolności do redukcji mRNA Lamin A. Skuteczność w obniżaniu poziomów prelaminy A określano za pomocą TaqMan (Applied Biosystems) z przednim primerem 5. -CCTGGTGGGCTCTGTCTCAA-3 ., starterem odwrotnym 5. -CCTTCGTCCCCCACTCTTC-3. I sondą 5. -ATGGAGGGCAATGTCAAGTGGGATACAG-3 .. Najbardziej aktywnym oligonukleotydem antysensownym był ISIS 359445 (5. -GGGTTCCTTAGTGTTTGCTG-3 ., 2. -MOE pRzpomodyfikowane reszty zostały podkreślone, innymi resztami są 2a-deoksyryboza, wszystkie wiązania są estrem tioinowym). ISIS 359445 lub oligonukleotyd kontrolny transfekowano do typu dzikiego lub Zmpste24 . /. myszy, jak opisano wcześniej (40). W skrócie unieśmiertelnione mysie fibroblasty wysiano na 6-studzienkowe płytki do hodowli tkankowych (55 000 komórek / dołek) lub 24-studzienkowe płytki (35 000 komórek / dołek) i pozostawiono do przylgnięcia przez noc. Komórki przepłukano zredukowaną surowicą Opti-MEM I (Invitrogen Corp.) i transfekowano oligonukleotydami modyfikowanymi 2 (3-MOE p (2,5. 30 nM) przy użyciu 3. L / ml Lipofectin (Invitrogen Corp.) w 37 ° C dla 5. 7 godzin. Pożywkę aspirowano i zastępowano świeżą pożywką hodowlaną (DMEM plus 10% FCS). Komórki hodowano przez dodatkowe 48. 72 godziny i poddano obróbce pod kątem blottingu Western (6-studzienkowego) lub immunofluorescencyjnego (24-studzienkowe). Analiza Western blot. Rozpuszczalne w moczu mysie zarodkowe ekstrakty fibroblastów przygotowano jak opisano uprzednio (42), a porcje rozdzielono na żelach Bis-Tris o gradiencie 4. 12% poliakryloamidu z systemem NuPage (Invitrogen Corp.). Rozdzielone wielkościowo białka przenoszono elektroforetycznie na membrany nitrocelulozowe do analizy Western blotting. Rozcieńczenia przeciwciał zawierały 1: 5000 króliczej surowicy odpornościowej antyfllaminą A, kozie przeciwciało anty-luteinowe 1: 400 (Santa Cruz Biotechnology Inc.), kozie przeciwciało anty-B 1: 400 (Santa Cruz Biotechnology Inc.), 1: 2000 koziego anty-aktyny IgG (Santa Cruz Biotechnology Inc.), 1: 6 000 znakowanego HRP anty-króliczego IgG (Amersham Biosciences), 1: 6 000 znakowanego HRP anty-koziej IgG (Santa Cruz Biotechnology Inc.), i 1: 4000 wyznakowanych HRP anty-mysich IgG (Amersham Biosciences). Wiązanie przeciwciał wykrywano za pomocą układu chemiluminescencyjnego ECL Plus (Amersham Biosciences) z późniejszą ekspozycją na film rentgenowski. . Skany CT. Myszy typu dzikiego, Zmpste24 A (3, Lmna + / + i Zmpste24 (3 / Lmna + / + badano (n = 2 na genotyp, wiek 28. 30 tygodni) za pomocą tomografii typu kompaktowej stożka (skaner MicroCT 40; Scanco Medical) (14). Skany całego ciała zostały wykonane w płaszczyźnie osiowej zamontowanej w cylindrycznym uchwycie próbki o prądzie 0,16 mA i napięciu 70 kV przy rozmiarze wokseli izotropowej 20,5 .m dla czaszek i 30,7 .m dla pozostałej części szkieletu . Układ został skalibrowany za pomocą widma hydroksyapatytu o znanej gęstości. . Obrazy CT skonstruowano w matrycach 1024 x 1024 pikseli ze standardową procedurą rzutowania z odwrotną projekcją z filtrem Shepp-Logan. Trójwymiarowe obrazy całych kości zrekonstruowanych z indywidualnych (3 plasterków CT użyto do jakościowej oceny struktury i morfologii całej kości. Ograniczony 3-wymiarowy filtr gaussowski zastosowano do częściowego tłumienia szumu. Tkanka kości została podzielona na segmenty ze szpiku i tkanki miękkiej za pomocą procedury progowej. Eksperymenty z odkształceniami jądrowymi. Eksperymenty przeprowadzono w sposób opisany uprzednio przez Lammerding i in. (12). W skrócie, komórki wysiewano na gęstość komórek o stężeniu subkonfluentnym na błony silikonowe powleczone fibronektyną w DMEM uzupełnionym 10% FCS, a następnie głodzenie w surowicy przez 48 godzin w DMEM zawierającym suplement ITS (insulina, transferyna, selenin) (Sigma-Aldrich)
[przypisy: przychodnia ogrody bydgoszcz, tasiemiec bąblowiec, olx pińczów ]