rehabilitacja tarnów mościce

Transfekcje przeprowadzono w dwóch powtórzeniach. Analiza morfologiczna komórek i testy śmierci komórkowej. Do analizy immunofluorescencyjnej transfekowane komórki hodowane na szkiełku nakrywkowym przemywano PBS i utrwalano w 4% PFA przez 10 minut w temperaturze 4 ° C. Po zablokowaniu 10% normalną surowicą kozią, przeciwciało HBSP inkubowano w 37 ° C przez godzinę. Dodano drugorzędowe przeciwciało, skoniugowane z FITCa przeciwkrólicze (Amersham Life Sciences Inc.). Po 30 minutach w temperaturze 37 ° C jądra wybarwiono kontrastowo barwnikiem 7-amino-aktynycyny D (7-AAD) w stężeniu 40 .g / ml przez 5 minut. Podobnie, komórki transfekowane wektorami rekombinowanego zielonego białka fluorescencyjnego (GFP), które hodowano na szkiełku nakrywkowym, utrwalano 4% PFA, a następnie analizowano za pomocą epifluorescencyjnego mikroskopu laserowego (Zeiss North America, Thornwood, New York, USA) lub lasera konfokalnego (Leica). Inc., Deerfield, Illinois, USA) mikroskop. W celu analizy cytometrii przepływowej w celu oceny ilościowej DNA komórki zebrano we wskazanych punktach czasowych po transfekcji GFP-HBSP. Zielone komórki fluorescencyjne i komórki kontrolne sortowano przy użyciu cytometru FACS Vantage (Becton Dickinson, Mountain View, Kalifornia, USA), a następnie inkubowano przez 15 minut w 37 ° C w buforze do lizy (1 x PBS, 0,1% cytrynianu i 0,1% Triton). ) zawierający 50 .g / ml jodku propidyny. Zawartość DNA analizowano za pomocą FACScan (Becton Dickinson). Wyniki Wykrywanie in vivo białka HBSP. Używając peptydu z 20 aminokwasami, zsyntetyzowanego z sekwencji HBSP (aminokwasy 43-63), opracowaliśmy pośredni test ELISA do wykrywania przeciwciał anty-HBSP w surowicy od pacjentów z przewlekłym HBV. Wyniki wykazały znaczny wzrost średniej reaktywności w surowicy z przewlekłych nosicieli HBV (1,14 OD) w porównaniu z normalnymi surowicami (0,36 OD) lub surowicami od pacjentów z HCV (0,63 OD), autoimmunologicznym zapaleniem wątroby (0,57 OD) lub przewlekłym alkoholowym zapaleniem wątroby. (0,56 OD) (Figura 1b). Siedemnaście z 45 (38%) próbek surowic pochodzących z przewlekłych nosicieli HBV wykazało reaktywność wyższą niż granica odcięcia 1,3 OD, w porównaniu z 3 z 132 (2,3%) próbek surowic kontrolnych. Analiza statystyczna przeprowadzona na reprezentacji wykresu pudełkowego za pomocą testu Student. St wykazała wysoce znaczącą różnicę (P = 0,0001) między tymi 2 grupami. W grupie przewlekłych nosicieli HBV przeciwciała anty-HBSP stwierdzono głównie u pacjentów z wykrywalną wiremią (15 z 17 pacjentów). Odwrotnie, większość pacjentów z DNA HBV (10 z 12) miało ujemne wyniki testu anty-HBSP. Nie zaobserwowano jednak istotnej korelacji pomiędzy poziomem wiremii HBV i dodatnim wynikiem testu ELISA (dane nie przedstawione). Bezpośrednie wykrycie białka HBSP badano następnie za pomocą analizy Western biot tkanki z biopsji wątroby uzyskanej od 5 pacjentów z marskością wątroby związaną z HBV. Pasmo 10 kDa odpowiadające białku HBSP obserwowano przy zmiennej intensywności w 4 z 5 badanych próbek wątroby zakażonych HBV (Figura 1c, górny panel, ścieżki 3. 6 i dane nie pokazane). W przeciwieństwie do tego, ten prążek był niewykrywalny w tkance biopsyjnej wątroby od 2 pacjentów z marskością wątroby związaną z HCV i prawidłową wątrobą, która działała jako kontrola (Figura 1c, góra, ścieżki 1, 2 i 7). Konkurencyjny eksperyment wykorzystujący transferazę S-białka glutationu – rekombinowane białko HBSP dodatkowo wykazało specyficzność wykrywania HBSP. Adsorpcja przeciwciał anty-HBSP za pomocą GST-HBSP zniosła wykrywanie białka fuzyjnego GFP-HBSP ulegającego ekspresji przejściowo w komórkach CCL13 (Figura 1c, dół, porównaj ścieżki i a). Podobnie, adsorpcja znosiła wykrywanie pasma 10 kDa w testowanych 2 HBSP-pozytywnych próbkach z biopsji wątroby (Figura 1c, dół, porównaj ścieżkę 2 z ścieżką 2a i ścieżkę 3 z ścieżką 3a). Ogólnie, nasze dane wyraźnie wykazały ekspresję in vivo białka HBSP
[przypisy: tormentiol trądzik, tasiemiec bąblowiec, olx wieruszów ]