rezonans magnetyczny bielsk podlaski kontakt

W celu dalszego zwiększenia pewności, że ektodomena KIM-1 w komórkach była bezpośrednio odpowiedzialna za wiązanie i internalizację, działając jako receptor fagocytujący, wygenerowaliśmy mutację skróconą KIM-1 (KIM1-ekto), która eksprymowała tylko 5 aminokwasów pozakomórkowo. ale wyraził domenę transbłonową i wewnątrzkomórkową normalnie w komórkach. W porównaniu z komórkami pcDNA-PK1, komórki .-KIM1-ekto-PK1 nie wykazywały wzmocnienia fagocytozy w naszych testach fagocytozy (dane nie pokazane). Aby dodatkowo podkreślić, że efekt fagocytarny KIM-1 był bezpośrednią interakcją, a nie z powodu indukcji innych receptorów fagocytujących, ocenialiśmy KIM1-PK1 i komórki kontrolne pod względem ekspresji CD36 (białko) i lox-1 (transkrypt), ale stwierdzono brak ekspresji tych receptorów fagocytujących. Co interesujące, receptor zmiatający B1 (białko) był wyrażany zarówno przez komórki kontrolne, jak i komórki KIM1-PK1 na równych poziomach (danych nie pokazano). Ektodomeną KIM-1 wiąże się specyficznie z powierzchnią apoptotycznych komórek nabłonkowych nerek i PS. Aby dalej badać biologię KIM-1, oceniano wiązanie KIM1-Fc z komórkami (Figura 6). KIM1-Fc wiąże się swoiście z powierzchnią komórek apoptotycznych, ale nie powierzchnią komórek prawidłowych (fig. 6, A i B). Kontrolne białka c-Retc Fc i ludzkie IgG nie przylegały do apoptotycznych lub normalnych komórek (Figura 6, A i B). Wiązanie KIM1-Fc zniesiono przez dodanie chelatorów wapnia i magnezu, EGTA i EDTA i przywrócono w obecności nadmiaru wapnia, co wskazuje, że wiązanie zależy od dwuwartościowych kationów (Figura 6C). Odnotowano zależność od dwuwartościowego kationu w odniesieniu do wiązania innych receptorów z rodziny receptorów linii komórek szpikowych, które wiążą komórki apoptotyczne i nekrotyczne (17, 19, 20). Figura 6 Ektodomeną KIM-1 wiąże się specyficznie z powierzchnią apoptotycznych komórek nabłonka i wiąże się specyficznie z PS i PE. (A) Wykres histogramu cytometrii przepływowej fluorescencji prawidłowych komórek nabłonka LLC-PK1 (lewy panel) lub apoptotycznych komórek nabłonka LLC-PK1 (prawy panel), wyznakowanych KIM1-Fc, a następnie anty-hIgG-FITC (zielony), . hIgG-FITC sam (czerwony) lub brak odczynników (niebieski). Zwróć uwagę na około 50-krotny wzrost wiązania KIM1-Fc z komórkami apoptotycznymi. (B) Reprezentatywne fotomikrografy apoptotycznej komórki LLC-PK1 wyznakowanej KIM1-Fc (zielony, prawy panel) i normalne, żywe komórko LLC-PK1 oznaczone identycznie (lewy panel). Jądra były słabo wybarwione DAPI (niebieskim) w obu komórkach. Oryginalne powiększenie, × 60. (C) Wykres średniej szczytowej fluorescencji dla wiązania KIM1-Fc z komórkami apoptotycznymi w nieobecności lub obecności chelatujących wapnia EDTA / EGTA, ocenianych za pomocą cytometrii przepływowej. Wiązanie KIM1-Fc zostało zniesione przez chelatory wapnia, a wiązanie przywrócono przez dodanie nadmiaru wapnia do chelatorów (* P = 0,006). (D) Wykres hamowania fagocytozy przez liposomy PS. Wstępne traktowanie komórek wykazujących ekspresję KIM-1 (3 za pomocą liposomów PS prawie całkowicie zniosło fagocytozę apoptotyczną z udziałem KIM-1 (3 (** P = 0,007), podczas gdy równomolowe liposomy PC nie wywierały żadnego działania. Paski błędów wskazują SD. (E) Krzywe wiązania in vitro dla oczyszczonego wiązania KIM1-Fc z równomolowymi płytkami ELISA powleczonymi fosfolipidem. Wiązanie KIM1-Fc wykryto anty-ludzką IgG. Przeciwciało skoniugowane z HRP, a następnie test kolorymetryczny. Uwaga: KIM1-Fc wiąże się z aminofosfolipidami PS i PE, ale nie z PC lub anionowym kwasem fosfatydowym (PA), podczas gdy kontrolne białka Fc, ludzkie IgG i c-Retfcc nie wiążą się. W przeciwieństwie do komórek żywych, komórki apoptotyczne eksponują na zewnętrznej warstwie błony plazmatycznej (15) aminofosfolipidy PS i fosfatydyloetanoloaminę (PE). Eksponowane lipidy są celami wykorzystywanymi przez profesjonalne fagocyty do rozpoznawania komórek apoptotycznych (15)
[podobne: nervocalm opinie, validol cena, duofilm cena ]