syndrom ruchliwych nóg

Co godne uwagi, pojedynczy allel LmnaLCO wyeliminował nieprawidłowości w kształcie jądra i fenotypy choroby typu progerii w Zmpste24. /. myszy. Nasze badania wykazały, że laminat A wydaje się być zbędny, otwierając nową strategię leczenia progerii i innych chorób związanych z Lamin A. Wyniki Tylko myszy Lamin C.. Jedynie myszy Lamin C . wytworzono podczas próby wytworzenia allelu Lmna, z wytworzeniem laminatu C typu dzikiego i zmutowanej prelaminy A wytworzonej w HGPS. Użyliśmy targetowania genu do stworzenia myszy ze zmutowanym allelem Lmna pozbawionym ostatnich 150 nukleotydów eksonu 11 i całego intronu 11 (Figura 1, Ap, C), przewidywana mutacja doprowadziłaby do wytworzenia obciętej prelaminy A znalezionej w HGPS (17). Nieoczekiwanie jednak ta delecja (która wytworzyła egzon fuzyjny ekson 11-12) zapobiegła tworzeniu transkryptu prelaminy A, ponieważ fuzja egzon1112 nie została rozpoznana przez maszynerię do składania mRNA. Tak więc transkrypt L-CLA był jedynym produktem tego zmutowanego allelu Lmna (Figura 1D). Wyznaczyliśmy to jako allel laminowany wyłącznie C (LmnaLCO). Zgodnie z nieobecnością transkryptu prelaminy A, Western blot Lmna + / + fibroblastów z przeciwciałem przeciwko Laminom A i C ujawnił laminat C i absolutnie nie miał laminatu A, nawet w prześwietlonych Western blotach (Figura 1E). Figura 1Produkcja zmutowanego allelu Lmna, LmnaLCO. (A) Wektor zastępujący sekwencję został użyty do usunięcia intronu 11 i ostatnich 150 nukleotydów eksonu 11. Nieoczekiwanie, ta mutacja wyeliminowała zdarzenie splicingowe wymagane do wytworzenia prelaminy A. Egzony pokazano jako ramki. Lokalizacje starterów PCR (i i ii) i 5. przedstawiono sondę flankującą do analizy Southern blot. tk, gen kinazy tymidynowej (do selekcji negatywnej). (B) Wykrywanie Southern blot allelu LmnaLCO (LCO / +) w rozciętym EcoRI genomowym DNA z komórek ES. (C) Identyfikacja PCR alleli typu dzikiego i LmnaLCO. Pokazano wyniki dla klonów z komórek ES typu dzikiego (A10, C12) i LmnaLCO / + (B10, B11, B12) z eksperymentów ukierunkowanych na geny. (D) Northern blot całkowitego RNA z Lmna + / + (+ / +), LmnaLCO / + (LCO / +) i Lmna + / + (LCO / LCO) fibroblasty; blot hybrydyzowano z mysią sondą cDNA Lmna, która wykrywa zarówno transkrypty prelaminy A i laminatu C, jak i mysią sondę cDNA Lmnb1, która wykrywa laminat B1, blisko spokrewnione białko laminatu. (E) Western blot 3 różnych linii typu dzikiego, 2 heterozygotycznych i homozygotycznych linii pierwotnych komórek fibroblastów przy tej samej liczbie pasaży z poliklonalnym przeciwciałem przeciwko laminatowi A / C i aktynie. Mniejsza forma laminatu A pozbawionego egzonu 10 została wcześniej opisana w niektórych komórkach ludzkich (43). Można sobie wyobrazić, że ten mniejszy laminat można zsyntetyzować, ale wymagałoby to splicingu z eksonu 9 do fuzji eksonów 11-12. Nie zidentyfikowaliśmy tego mniejszego wariantu splicingowego w fibroblastach tylko z laminatem C21. W fibroblastach typu dzikiego, prelaminę A i transkrypty z L C były obecne w podobnych ilościach, jak określono metodą Northern blot (Figura 1D). W komórkach Lmna + / + cała transkrypcja Lmna została przekierowana do produkcji laminatu C, a zatem poziomy transkryptu L-C-C w komórkach Lmna + / + były wyższe niż w komórkach typu dzikiego (Figura 1D). Podobnie, ilość białka L-C w Lmna + / + i LmnaLCO / + fibroblastów była wyższa niż w komórkach typu dzikiego, jak oceniano za pomocą Western blot (Figura 1E). Lmna. /. myszy wykazują opóźnienie wzrostu i osłabienie mięśni, o czym świadczy niezdolność do zawieszenia głową w dół z siatki (11). Żadna nieprawidłowość nie występowała u myszy Lmna + / +. W rzeczywistości myszy Lmna + / + były nieodróżnialne od myszy kontrolnych typu dzikiego pod względem ich wzrostu i siły chwytu (Figura 2). Myszy wydawały się normalne w ciągu 2 lat obserwacji, a badania sekcyjne i histologiczne nie ujawniły żadnych nieprawidłowości w mięśniu szkieletowym lub mięśniu sercowym lub jakiejkolwiek innej tkance (dane nie przedstawione). Rysunek 2 Wzrost grubości i siła chwytu są normalne w Lmna + / + i LmnaLCO /. myszy
[podobne: nervocalm opinie, przychodnia ogrody bydgoszcz, borówka amerykańska kalorie ]